细胞培养应注意哪些问题？

(1)【◆题库问题◆】：[问答题] 细胞培养应注意哪些问题？

【◆参考答案◆】：
体外培养细胞必须注意三个环节：物质营养、生存环境和废物的排除。
体外培养细胞所需的营养是由培养基提供的。培养基通常含有细胞生长所需的氨基酸、维生素和微量元素。一般培养细胞所用的培养基是合成培养基，它含有细胞生长必需的营养成分：但是在使用合成培养基时需要添加一些天然成分，其中最重要的是血清，以牛血清为主。这是因为血清中含有多种促细胞生长因子和一些生物活性物质。
由于血清中含有一些不明成分，对于特殊目的细胞培养是不利的。为此，研究人员正在探索无血清培养细胞的条件，并已经取得一些进展。由于机体内的细胞生长通常需要不同的细胞因子进行调节，所以，在无血清培养时仍然需要添加必要的因子，包括促细胞生长因子（如EGF.，促贴附物（如层黏连蛋白）和其他活性物质（如转铁蛋白）。无血清培养排除了有血清培养时血清中不明因素的干扰，使实验结果更加可靠。
体外细胞培养必须模拟体内细胞生长的环境。环境因素主要是指无菌环境、合适的温度、一定的渗透压和气体环境。气体主要有两种，即O2和CO2。后者对于维持细胞培养液的酸碱度十分重要。
活体内生长的细胞所产生的代谢物和废物通过一定的系统进行利用和排除。体外培养细胞产生的代谢物和废物积累在培养液中，所以定期更换培养液，对于体外细胞培养也是至关重要的。

(2)【◆题库问题◆】：[多选] 倒置显微镜的特点是（）
A．物镜与照明系统位置颠倒
B．可用于观察活细胞
C．通常采用相差物镜
D．装配影像记录设备
E．以电子束作为光源

【◆参考答案◆】：A, B, C, D

(3)【◆题库问题◆】：[名词解释] ultramicrotomy （超薄切片技术）

【◆参考答案◆】：电子书穿透力很弱，须将标本制成40~50nm的超薄切片。方法与步骤：固定；脱水；包埋；切片；染色。

(4)【◆题库问题◆】：[名词解释] 原代细胞培养

【◆参考答案◆】：
是指直接从有机体中取得细胞或组织后立即进行的培养，严格的说是指成功继代之前的培养，此时细胞保持原有的基本性质，通常把第一代到第十代以内的培养细胞统称为元代细胞培养。

(5)【◆题库问题◆】：[单选] 关于光学显微镜，下列哪项有误（）
A．是利用光线照明，将微小物体形成放大影像的仪器
B．细菌和线粒体在光镜下能清晰可见
C．由机械系统、光学系统和机械装置三大部分构成
D．可用于观察细胞的显微结构
E．其分辨力由目镜决定

【◆参考答案◆】：E

(6)【◆题库问题◆】：[单选] 下列最不可能成为原代细胞培养的细胞来源是（）
A．成年鼠脑组织
B．活跃生长的恶性肿瘤组织
C．胚胎组织
D．植物原生质体
E．乳鼠肾脏

【◆参考答案◆】：A

(7)【◆题库问题◆】：[单选] 一般显微镜的分辨力数值约为0.2μm，人眼在25cm处的分辨力是0.2mm，所以一般显微镜设计的最高放大倍率为（）
A．2000×
B．1000×
C．100×
D．200×
E．10000&time

【◆参考答案◆】：B

(8)【◆题库问题◆】：[单选] 利用放射性核素标志物质能使照相乳胶感光的原理来探测细胞内某种物质的含量与分布的方法是（）
A．放射自显影技术
B．免疫荧光显微镜技术
C．免疫电镜技术
D．液相杂交技术
E．原位杂交技术

【◆参考答案◆】：A

(9)【◆题库问题◆】：[名词解释] differential-interference microscope（微分干涉显微镜）

【◆参考答案◆】：偏振光经合成后，使样品中厚度上的微小区别转化成明暗区别，增加了样品反差且具有立体感。适于研究活细胞中较大的细胞器

(10)【◆题库问题◆】：[单选] 形状和大小相同，但密度不同的细胞组分可采用哪种方法分离（）
A．差速离心
B．密度梯度离心
C．浮力密度离心
D．凝胶电泳
E．双向电泳

【◆参考答案◆】：B